Jaký je účel použití ddNTP?
Jaký je účel použití ddNTP?

Video: Jaký je účel použití ddNTP?

Video: Jaký je účel použití ddNTP?
Video: Opravdu se Xbox Game Pass vyplatí? - [Nesponzorovaný názor] 2024, Listopad
Anonim

DdNTP odkazuje na dideoxynukleotidy trifosfáty, které se používají v Sangerově dideoxy metodě k výrobě různých délek řetězců DNA pro sekvenování DNA. To má za následek ukončení procesu polymerace DNA (nebo prodlužování DNA), protože tento proces potřebuje k pokračování 3'-OH skupinu.

Proč se tedy ddNTP používají při sekvenování?

dideoxynukleotidy jsou inhibitory DNA polymerázy prodlužující řetězec, použitý v Sangerově metodě pro DNA sekvenování . Dideoxyribonukleotidy nemají 3' hydroxylovou skupinu, a proto nemůže dojít k žádnému dalšímu prodlužování řetězce, jakmile je tento dideoxynukleotid na řetězci. To může vést k ukončení DNA sekvence.

Podobně se ddNTP připojují k dNTP? Jeden nebo více z dNTP jsou radioaktivně označeny, aby usnadnily vizualizaci replikačních produktů. Nakonec každá zkumavka dostane jeden ze čtyř speciálních nukleotidů zvaných dideoxynukleotidy ( ddNTP ). Jakmile je však DNA polymeráza inkorporována, nemůže dále prodlužovat řetězec, protože potřebuje 3'-OH připojit na další nukleotid.

Podobně se lze ptát, jak ddNTP zastaví sekvenační reakci?

Pokud je přítomen v malém množství v sekvenční reakce dideoxyribonukleosidtrifosfáty ( ddNTP ) ukončit sekvenační reakce na různých pozicích v rostoucích řetězcích DNA. ddNTP zastaví sekvenační reakci protože: způsobují, že DNA polymeráza odpadne z templátového řetězce. C.

Jaká technika zahrnující dideoxynukleotidy by mohla být použita?

Sangerovo sekvenování je a metoda DNA sekvenování založené na selektivním začlenění zakončení řetězce dideoxynukleotidy DNA polymerázou během in vitro DNA replikace. Vyvinutý Frederickem Sangerem a kolegy v roce 1977, byl nejrozšířenější použitý sekvenování metoda po dobu přibližně 40 let.

Doporučuje: