Obsah:

Jak vybíráte klony?
Jak vybíráte klony?

Video: Jak vybíráte klony?

Video: Jak vybíráte klony?
Video: София Ротару и Яак Йоала "Лаванда". Новогодний Голубой огонек (1985) 2024, Listopad
Anonim

Když vybírání A klon Ujistěte se, že kořeny jsou silné, bílé a dychtivě vyčnívají z pěstebního média. Pokud jsou kořeny hnědé a scvrklé nebo jinak vypadají neaktivní, vraťte je zpět a vyhledejte lepší.

Kromě toho, jak naklonujete jednu buňku?

  1. Spočítejte buňky, abyste vložili ~16 000 buněk do první jamky (A1) 96jamkové destičky obsahující 200 ul média.
  2. Odeberte 100 µl z buněk obsahujících A1 a smíchejte s B1, pipetováním nahoru a dolů 3x dobře promíchejte, než odeberete 100 µl a smícháte s C1 atd.

Také, jak si vybrat savčí buněčnou kolonii? Umístěte destičku pod mikroskop, abyste vybrali nediferencované zdravé kolonie . Vyberte kolonie pomocí pipety P-20 nastavené na 10ul. Opatrně výběr A kolonie aniž by došlo k rozbití kolonie do singlu buňky a přeneste jej do 96jamkové destičky s trypsinem. Pipetujte několikrát nahoru a dolů, aby se rozptýlil kolonie.

Jak tedy používáte klonovací válec?

Použitím sterilní střední kleště, vyzvednout a klonovací válec . Jemně zatlačte na ploché dno válec do hladkého silikonového tuku a prudkým vertikálním pohybem odstraňte. Pokud se to provede správně, zajistí to rovnoměrné rozložení tuku na spodní straně válec . Nastav válec nad kolonií.

Jak vybíráte kolonie pro stabilní buněčné linie?

Protokol pro generování stabilních buněčných linií vyžaduje několik kroků, jak je uvedeno níže:

  1. Vygenerujte křivku zabíjení pro stanovení optimální koncentrace výběrového antibiotika.
  2. Transfekce buněk požadovaným plasmidovým konstruktem (konstrukty)
  3. Vyberte a rozšiřte stabilní polyklonální kolonie.
  4. Identifikujte jednotlivé klony omezeným ředěním a expanzí.

Doporučuje: